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药理学实验报告范文药理学实验总结报告

时间：2023-08-15 10:50:16 文档下载投诉投稿

篇一：药理学实验报告 1

实验三 1、地西泮抗惊厥作用

【目的】观察地西泮的抗惊厥作用。

【原理】尼可刹米可吸收入血，以至出现兴奋、抽搐、惊厥。地西泮作用于边缘系统，加强了gaba能神经元的抑制作用，可有效地对抗中毒性惊厥。

【动物】家兔1只，体重2kg~3kg。

【药品】0.5%地西泮溶液、25%尼可刹米。

【器材】兔固定箱、台式磅秤、注射器（5ml）、针头（6号）。

【方法】取家兔1只，秤重并观察正常活动情况，然后静脉注射25%尼可刹米（0.5ml/kg 给药）。观察动物的活动姿势、肌张力及呼吸等变化。当家兔出现明显惊厥后，由

耳静脉缓慢推注0.5%地西泮（按0.5ml/kg~1ml/kg给药），直到肌肉松弛为止。

【结果】将实验结果填入下表。

表地西泮对兔惊厥作用的影响

给药前

家兔反应正常尼可刹米给药后惊厥、肌肉强直肌肉松弛、镇静、催眠注射地西泮【讨论题】地西泮抗惊厥作用、作用机制及用途有哪些？

【注意事项】家兔出现强直性惊厥后，应缓慢推注地西泮，过快可抑制呼吸。

2、用化学刺激法观察药物的镇痛作用

【目的】观察药物的镇痛作用；学习化学刺激法筛选镇痛药或比较药物镇痛效果的方法。【原理】腹膜的感觉神分布广泛，把醋酸等化学刺激物注入腹腔，使小鼠产生疼痛反应，表现为腹部双侧凹陷，躯体扭曲，后肢伸展，臀部高起，称扭体反应。曲马多有镇痛作用，可明显抑制扭体反应。

【动物】小鼠2只，体重28g~32g。

【药品】0.2%盐酸曲马多溶液、0.6%醋酸溶液、生理盐水。

【器材】天平、注射器（1ml）、针头（5号）、秒表。

【方法】

1、取小鼠2只，称重后观察正常活动后标号。

2、甲鼠腹腔注射盐酸曲马多溶液0.1ml/10g；乙鼠腹腔注射生理盐水0.1ml/10g。

3、给药30min后两鼠均腹腔注射醋酸0.2ml/只，观察记录注射醋酸后15min内两鼠出现扭体反应情况。

【结果】

表药物对醋酸所致小鼠疼痛作用的影响

鼠号药物用药前扭体反应次数

甲

乙

醋酸---盐酸曲马多醋酸---生理盐水 4 19 用药后扭体反应次数 0 16

【讨论题】

结合实验结果说明曲马多的镇痛效果与临床用途。

【注意事项】1、醋酸溶液在实验前临时配制。

2、小鼠体重轻，扭体反应出现率低。

3、扭体反应任何一项表现即可为阳性，扭体反应减少50%以上，才能认为有镇痛效力。

篇二：药理学实验

《病理学》实验报告

实验报告（一）

实验名称实验性肺水肿时间成绩

实验目的熟悉病理生理学和病理解剖学的实验方法，掌握急性肺水

肿的影响因素。

材料：家兔、手术器材、静脉输液器材、生理盐水、5%乌拉坦和

1mg肾上腺素等。

实验方法：给麻醉家兔做气管插管手术后，按80ml/kg给家兔颈总静脉输液，150~180滴/分。输液完成后，静脉注射0.5mg/5ml肾上腺素。观察1家兔呼吸频率和有无呼吸困难；2气管插管处有无异常。出现后，夹住气管，处死动物，开胸结扎支气管，游离两肺。吸干表面水分，称肺重量，计算系数。(肺重/体重—正常4~5)。观察肺脏及剖面。

实验结果:

呼吸观察：输液完成，给肾上腺素后，呼吸频率由60/分升高至100/

分并呼吸增强；鼻、耳部皮肤青紫，气管插管处可见粉红

色泡沫粘液。

肺重系数: 0.175/2.5*100=7

标本观察：肺暗红色，弹性减弱。剖面有粉红色泡沫液体流出。

讨论与结论：

成功演绎急性肺水肿病理形成过程。

大量快速输液，使血浆胶体渗透压下降50%左右，肾上腺素起到强心作用升高血压，增加肺毛细血管压。两个因素使肺内组织液快速大量生成，进一步漏出进入肺泡；毛细血管扩张，少量渗出红细胞，因此出现粉红色泡沫液体。肺水肿影响肺换气，出现发绀，皮肤青紫色。肺水肿表现器官重量增加。

实验报告（二）病理观察

观察内容：大叶性肺炎大体标本，脂肪肝大体标本。急性肝炎病理组织切片。

肉眼所见：

标本 1 病变肺叶肿胀，质地硬；切面灰红色，较粗糙。肺胸膜表面有纤维素渗出物附着。

标本2 肝体积增大，被摸紧绷，表面油腻光亮，肝脏呈淡黄色。

镜下所见：

高倍镜：肝细胞体积肿大多见，胞浆淡染疏松状；肝细胞点状坏死，坏死细胞大小不等，细胞核凝固染色深，还可见细胞核碎裂呈小块状，还可见细胞核疏松近消失。汇管区和坏死区有明显的炎性细胞侵润。

实验报告（三）病例讨论

教师问题：这个病人的以下临床表现各考虑是什么病变？

1、既往劳累、激动时发作，心前区痛，有伴随症状，休息、治疗后缓解。

2、此次下午心前区剧痛，呼吸困难，咳粉红色泡沫痰，两肺湿罗音。

3、晚间突然昏倒，神志不清，抢救无效死亡。

死者尸检心、脑、肺会有何种表现？

学生分析初步结论

1心绞痛

2心肌梗死和左心衰

3脑梗死或脑出血

支持初步结论的要有下例尸检结果心脏：冠状动脉狭窄或血栓栓塞；心肌梗死灶边缘地图状，边缘

有出血带；坏死组织色浅凝固状。

脑：体积增大脑水肿；脑动脉粥样硬化、狭窄或血栓栓塞；脑梗

死灶色浅，边缘有出血带；脑出血病灶。

肺：两肺体积增大，颜色暗红，切面见暗褐色泡沫液体流出。

小组讨论摘要

临床表现和病理检验，诊断为动脉粥样硬化症引起心、脑等重要器官病变。

教师总结

理论联系实际，收到良好的学习效果。篇三：药理实验报告

药理学实验报告

学校：学院：

班级：学号：

姓名：指导老师：

元胡止痛片对小鼠镇痛抗炎镇痛活性研究

组员：指导老师:

摘要：目的：研究元胡止痛片是否具有镇痛抗炎的效果。方法：使用小鼠热板法、醋酸扭体法、耳肿胀法，并分别建立小鼠的镇痛抗炎模型，观察元胡止痛片对小鼠的镇痛抗炎作用的影响。结果：1.热板法：元胡止痛片对小鼠热板法实验中给药60分钟后有显著性差异，阳性药阿司匹林与生理盐水组相比有明显的痛阈降低，低浓度与生理盐水组相比有痛阈降低。2. 醋酸扭体法：实验结果有显著差异，阿司匹林阳性药与高浓度元胡溶液相比有显著性差异，阳性药有明显的镇痛作用。而阿司匹林组与生理盐水，低浓度与生理盐水组没有出现显著性差异。

3. 热肿胀法：结果显示无显著性差异，阳性药阿司匹林没有明显的抗炎活性。结论：阿司匹林阳性药有抗炎镇痛作用，元胡止痛片无抗炎镇痛作用。关键词：元胡止痛片；镇痛；抗炎；热板法；醋酸扭体法；耳肿胀法

元胡止痛片为中药复方制剂，由延胡索(醋制)、白芷等中药组成，延胡索(醋制)具辛、苦、温，归肝脾经，由活血、理气、止痛等功效；白芷辛温，归胃、大肠、肺经，其功能与主治为散风除湿、通窍止痛、消肿排脓。该制剂为中国药典方，临床上用于气滞血淤的胃痛、胁痛、头痛及月经痛等。由于直肠给药50％以上的药物可以不通过肝脏而直接进入血液作用于全身，可避免口服引起的胃肠道刺激，同时减少。胃液和肝脏对药物的破坏和降解，从而提高药效减轻药物的不良反应。另外，直肠给药药物吸收缓慢，可使药效维持较长的时间。本实验旨在对元胡止痛栓的镇痛抗炎作用的研究。 1 材料与方法

1.1 动物健康昆明种小白鼠，体重25±8g，雌性32只，雄性32只。健康昆明种小白鼠，体重40±10g，雄性，32只。

1.2 药品与试剂元胡止痛片，广西半宙天龙制药有限公司，批号130807；0.9%氯化钠注射液，新疆华世丹药业股份有限公司，批号214070702；阿司匹林肠溶片，临汾宝珠制药有限公司，批号140401；二甲苯，天津市富宇精细化工有限公司，批号120411；冰乙酸，天津市光复科技发展有限公司，批号090527。

1.3 仪器 yls-6b智能热板仪，淮北正华生物仪器设备有限公司，出厂日期071018；天孚牌jyt-5架盘药物天平，生产日期2011年8月；yls-25a电动耳肿打耳器，济南益延科技发展有限公司，出厂日期20140521；电子天平。 2 实验内容

2.1 热板法

2.1.1 动物筛选致痛潜伏期 (痛阈值)为 5~45s 之间的合格雌性小鼠。32只，热板法镇痛试验，筛选痛阈值合格的小鼠，取♀小鼠于给药前先用热板仪于55 ± 0.5 ℃分别测

定每只小鼠的正常痛阈值［将小鼠放于智能热板仪上至出现舔后足的所需时间作为痛阈值( s) ，连续2次，间隔30 s，测定平均值即为正常痛阈值］。将舔后足时间＜ 5 s 或＞45s，或跳跃者不用于此实验。

2.1.2 分组按体重随机分组，分4组，编号，每组8只。

2.1.3 给药 1组生理盐水空白对照组（按0.1mg/10g灌胃生理盐水），2组阿司匹林阳性对照组（按4mg/10g灌胃20mg/ml的阿司匹林），3组元胡止痛片低剂量组（按0.6mg/10g灌胃2mg/ml的元胡止痛片溶液），4组元胡止痛片高剂量组（按1.3mg/10g灌胃10mg/ml的元胡止痛片溶液）。

2.1.4 测定痛阈值各鼠给药前测定正常痛阈值。取智能热板仪，调节温度，使温度恒定在55±0．5℃，取每组合格雌性小鼠，按2.1.2灌胃不同药液，测定给药后每组15、30、60、90分钟后各鼠痛阈值。 2.1.5 痛阈提高百分率

用药后平均热痛阈值—用药前平均痛阈

痛阈提高百分率=

用药前平均痛阈值

2.2 耳肿胀法

2.2.1 分组取雄性小鼠25±8g，32只，随机分为4组，编号，每组8只。

2.2.2 给药 1组生理盐水空白对照组（按0.1mg/10g灌胃生理盐水），2组阿司匹林阳性对照组（按4mg/10g灌胃20mg/ml的阿司匹林），3组元胡止痛片低剂量组（按0.6mg/10g灌胃2mg/ml的元胡止痛片溶液），4组元胡止痛片高剂量组（按1.3mg/10g灌胃10mg/ml的元胡止痛片溶液）。

2.2.3 测量每组给药30分钟后，给小鼠的右耳前后涂上二甲苯0.1ml/只，30分钟后处死小鼠，沿耳廓对称剪下两只耳壳，用yls-25a电动耳肿打耳器取耳片，称重，以两耳重量差计算肿胀度。 2.2.4 计算肿胀率

肿胀率（%）=[右耳片重（mg)-左耳片重（mg)]/左耳片重（mg)×100％ 2.3 醋酸扭体法 2.3.1 分组取雄性小鼠40±10g，32只，随机分为4组，编号，每组8只。

2.2.3 观察 5min后记录15分钟内各小鼠出现“扭体反应”的次数。 3 结果

3.1热板法表1 元胡止痛片对小鼠的痛阈影响（x?s，n=8）

* 100%

组别生理盐水空白对

照组阿司匹林阳性药

对照组低浓度元胡止痛

片对照组高浓度元胡止痛

片对照组

给药剂量给药60min后

给药15min后（s）给药30min后（s）给药90min后（s）

mg/10g （s）** 0.1

24.68 ±12.90

29.52 ± 19.42 23.61 ± 1.28 37.82 ±22.01

21.75 ±15.26 16.54± 9.85

20.96±8.69

15.76± 2.76* 23.81± 19.6614.90±2.77* 30.72± 16.10 18.73±3.81

23.85±18.25

4 0.6 1.3

18.75 ±17.10

16.64±6.38

19.17±6.43

**,60分钟时各组出现显著差异，p<0.01

*,1生理盐水空白对照组 vs 2阿司匹林阳性对照组，p<0.05 *,1生理盐水空白对照组vs 3低浓度元胡溶液组，

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p<0.05图1 元胡止痛片给药60分钟后对小鼠热板法实验的镇痛作用的影响

3.2耳肿胀法

表3 元胡止痛片对小鼠的抗炎作用（x?s，n=8）

组别

生理盐水空白对照组

给药剂量mg/10g

0.1

肿胀率（%） 62±33

67±46

72±32 64± 50

阿司匹林阳性药对照组 4低浓度元胡止痛片对照组 0.6

高浓度元胡止痛片对照组

1.3

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图2 元胡止痛片对小鼠耳肿胀实验抗炎作用的影响

3.2醋酸扭体法

表 2 元胡止痛片对小鼠的镇痛作用（x?s，n=8）

组别

生理盐水空白对照组

给药剂量mg/10g

0.1

扭体次数*

15±18

2±3^

20±19

33±24

阿司匹林阳性药对照组 4

低浓度元胡止痛片对照组 0.6

高浓度元胡止痛片对照组 1.3

*，小鼠镇痛作用出现显著差异，p<0.05

^, 2阿司匹林阳性对照组 vs 4高浓度元胡溶液组

,p<0.05

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图3 元胡止痛片对小鼠扭体实验的镇痛作用影响

4.结果分析讨论

参考文献：

[1] 李见春，黄继汉，桂常青，郑青山.元胡止痛栓镇痛作用的实验研究[j].中国临床药理学与治疗学,2004(04) [2] 唐岚.元胡止痛分散片药学研究[j].成都中医药大学,2002

[3] 徐叔云(au fy)，卞如濂(ban rl)，陈修(chen x)．药理实验方法学.[6] 刘和莉，李月玲，薛永志. 不同温度和醋酸浓度对小鼠扭体疼痛模型的影响[j] .包头医学院学报，2012（02）

[7] 中华人民共和国卫生部药政管理局．中药新药研究指南(药学、药理学、毒理学)[m]．1994；87

篇四：药理学实验报告(3)模版

药理学实验（人体解剖部分）报告（3）

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篇五：药理学实验总结

流式细胞术

背景：细胞凋亡是细胞的基本特征之一，它在机体的胚胎发育、组织修复、内环境的稳定和一些疾病发生过程等方面起着十分重要的作用。在正常细胞中，磷脂酰丝氨酸（ps）只分布在细胞膜脂质双层的内侧，而在细胞凋亡早期，细胞膜中的磷脂酰丝氨酸又脂膜内侧翻向外侧。在体内，巨噬细胞可以识别翻转到细胞膜表面的ps从而将这些程序性死亡的细胞清除，因此凋亡过程中并不伴随局部的炎症反应，而在细胞坏死的过程中则常常伴随着炎症反应。

annexinv是一种分子量为35-36kd的ca2+依赖性磷脂结合蛋白，能与细胞凋亡过程中翻转到膜外的ps高亲和力特异性结合。ps外翻发生在细胞核破裂，dna片段化以及凋亡相关蛋白出现之前，这使得annexinv与ps的结合成为凋亡早期的一种重要检测标志事件。

检测原理：用标记了fitc的annexinv作为荧光探针，利用流式细胞仪或荧光显微镜可检测细胞凋亡的发生。细胞坏死的过程中也会发生细胞膜损伤，坏死的细胞会结合annexinv-fitc。正常细胞核早期凋亡的细胞膜是完整的，propidium iodide(pi)是一种核酸染料，它不能透过完整的细胞膜，但在凋亡中晚期的细胞和坏死细胞，pi能够透过细胞膜与细胞核结合呈现红色。将annexinv与pi匹配使用，可以将凋亡早期的细胞和晚期的细胞以及死细胞区分开来。坏死细胞可以同时与annexinv-fitc和pi结合显色，而pi则被排除在活细胞（fitc阴性）和早期凋亡细胞（fitc阳性）之外。在没有巨噬细胞的情况下，凋亡的最后阶段会像细胞坏死一样发生整个细胞的解体，从而使凋亡晚期的细胞也同时被fitc和pi结合染色呈现双阳性。

在双变量流式细胞仪的散点图上，左下象限显示活细胞，为（fitc-/pi-）；右上象限是非活细胞，即坏死细胞，为（fitc+/pi+）；而右下象限为凋亡细胞，显现（fitc+/pi-）。

样品染色：

1、离心收集悬浮细胞，弃培养基。贴壁细胞用不含edta的胰酶消化后离心（300g*8min），收集细胞。胰酶消化时间不宜过长，以防引起假阳性。

2、用冷pbs洗涤细胞两次，尽可能吸尽pbs。3、用400ul(200ul)1xannexinv结合液悬浮细胞，浓度大约1x10*6cells/ml。

4、在细胞悬浮液中加入5ulannexinv-fitc染色液，轻轻混匀后于2-8度避光条件下孵育15分钟。

5、加入10ulpi染色液后轻轻混匀于2-8度避光条件下孵育5分钟。

6、立即用流式细胞仪或荧光显微镜检测。

注意事项：

1、螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液体洒落。

2、细胞处理要小心操作，尽量避免人为的损伤细胞。

3、annexinv-fitc和propidium iodide(pi)是光敏物质，在操作时请注意避光，尽量减少它们暴露在光下的时间。有必要时可以使用带盖子的冰盒或铝箔纸避光。4、由于细胞凋亡是一个快速和动态的过程，因此最好在染色后立即进行分析。

5、使用annexinv-fitc试剂盒检测凋亡需要针对活细胞。不需要固定细胞，固定操作会对结果产生干扰。

6、如果细胞样品中含有血小板，如血液样品，请使用含有edta的缓冲剂并200g

离心洗去血小板。因为血小板含有ps，能与annexinv结合。

7、流式细胞仪检测时，细胞数量应不低于1x10*5。

8、如果细胞收集过程中使用了胰酶，需注意用pbs洗净去除残留的胰酶。残留的胰酶会消化并降解annexinv-fitc，最终导致染色失败。

9、对于贴壁细胞，消化是一个关键步骤。贴壁细胞诱导凋亡时如有漂浮细胞，需收集漂浮细胞和贴壁细胞后合并染色；处理贴壁细胞时要小心操作，尽量避免人为的损伤细胞，胰酶的消化时间过短，细胞需要用力吹打才能脱落，容易造成细胞膜的损伤，pi摄入过多；消化时间过长，细胞膜同样易造成损伤，甚至会影响细胞膜上磷脂酰丝氨酸与annexinv-fitc 的结合。消化时将胰酶铺满孔板底后，轻摇使胰酶与细胞充分接触，然后倒掉大部分胰酶，利用剩余的少量胰酶再消化一段时间，待细胞空隙增大，瓶底呈花斑状即可终止。在消化液中应不用edta，edta影响annexinv与ps的结合。

10、成功的检测凋亡受以下几种因素的影响，如细胞类型、细胞膜上ps的密度、发生凋亡时ps翻转的比例、诱导细胞凋亡的方法、所用试剂、诱导凋亡的时间以及实验过程中机械损伤的程度等，把这些影响因素进行优化对试验成功与否至关重要。务必根据每次实验样本类型和操作流程对这些步骤进行优化。

11、有极少数细胞株其细胞膜上ps的密度极低，难以染色，此时不适合用annexinv方法检测凋亡。

细胞、组织基因组dna提取试剂盒（离心柱型）

样品预处理：

动物组织：

1、切取5-20mg的动物组织材料，在液氮中将组织研磨成粉末，并转移至1.5ml的离心管中。

2、然后加400ul acl solution 入和10ul的proteinase k。如有凝结块，可以用枪头吹吸打碎。

3、震荡混匀1分钟，然后置于55c放置20分钟—3小时，在此期间间或取出混匀，有助于充分裂解。裂解完全的样品应澄清透明。不同来源的组织，完全裂解时间可能差异较大。

4、取出样品，待降至室温时轻轻震荡混匀。啮齿类动物（如鼠等）尾巴：

1、从动物尾部末端切取0.5—1cm的组织材料，在液氮中将组织研磨成粉末，并转移至

1.5ml的离心管中。

2、然后加入400ul acl solution 和10ul的proteinase k。

3、震荡混匀1分钟，然后置于55c水浴10—20分钟，在此期间可以适当取出混匀，有助于充分裂解。

4、取出样品，待降至室温时轻轻震荡混匀。

培养成熟的动物细胞：

1、在500~1000rpm下离心约3~5分钟，收集细胞。

2、加入400ul acl solution 和10ul的proteinase k。

3、震荡混匀1分钟，然后置于55c水浴10—20分钟，在此期间可以适当取出混匀，有助于充分裂解。

4、取出样品，待降至室温时轻轻震荡混匀。

dna提取：

经过上面预处理的样品按照下面步骤提取基因组dna。

5、在经过预处理好的样品中，依次加入300ul ext solution 和 300ul ab solution，用力摇匀，然后12000rpm离心5分钟。溶液将分层，上层为蓝色的抽屉层，下层为透明水相，两层溶液中间可能会有部分沉淀层，dna在下层水相中。

注：如样品量较少或溶液澄清不粘稠，可不添加ext solution ，只添加300ulab solution，摇匀后离心。

6、将枪头穿过上层溶液，深入到下层溶液，将下层溶液仔细吸出到genclean column 中，尽量避免吸到上层溶液及中间层的沉淀。7、8000rpm离心1分钟，取下genclean column，倒掉收集管中废液。

8、将genclean column放回收集管中，加入500ul wash solution,8000rpm，室温离心1分钟。

9、重复步骤8一次。

10、取下genclean 柱，弃去收集管中的废液。将柱放回收集管中，12000rpm，室温离心1分钟，以除去残留wash solution。

11、将柱放入新的洁净1.5ml的离心管中，在柱中央加入50~100ul elutionn buffer，室温或55c放置2分钟。然后12000rpm，室温离心1分钟。离心管中的液体即为基因组dna。根据用途，样品可于4c或-20c保存。

乳酸脱氢酶（ldh）测定试剂盒

一、试剂盒组成及配制：试剂一：基质缓冲液

试剂二：辅酶1，配制：每支粉剂加1.3ml双蒸水溶解，溶解后冷冻可保存2周，如需多次使用建议分装冷冻。

试剂三：2,4-二硝基苯肼

试剂四：4mol/l naoh，0.4mol配制：10倍稀释。

试剂五：2umol/l丙酮酸标准液。

二、测定步骤：

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三、计算及举例：

血清中ldh活性（u/l）=测定od值-对照od值/标准od值-空白od值x标准品浓度xnx1000（n为待测样本测定前稀释倍数）

乳酸脱氢酶释放率=培养基中酶活性/培养基中酶活性+细胞层酶活性。

试验中需要同时检测培养基和细胞裂解后细胞悬液中的乳酸脱氢酶。

四、测定原理：

ldh

乳酸

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丙酮酸

37c水浴

丙酮酸 + 2,4-二硝基苯肼丙酮酸二硝基苯腙（红棕色）碱性

根据比尔定律，可测乳酸脱氢酶活性。

五、标准曲线制备：

1、前处理：将2umol/ml的丙酮酸标准品用双蒸水分别200倍、100倍、50倍、20倍、10倍、5倍、2倍稀释后按照操作表制作标准曲线。

混匀，室温放置5分钟，波长450nm，酶标仪测定吸光度。

免疫细胞化学（免疫荧光染色）

一、试剂及材料：

六孔板、盖玻片、移液枪、枪头、丙酮、pbs、triton x-100、h2o2、bsa、一抗、二抗、湿盒、甘油。

二、方法：

将已灭菌的盖玻片置于6孔培养板中，按10*4~10*5/ml的密度将细胞接种于培养板中进行爬片，培养6~12小时，待细胞贴壁后，3~5天进行免疫细胞组织化学染色鉴定。pbs清洗时将玻片置于小培养皿中。

步骤如下：

1、pbs清洗标本3次，各3min.

2、95%酒精（或冰丙酮等其它固定剂）固定15min.

3、空气干燥5min。

4、pbs清洗标本3次，各3min。

5、0.3% triton x-100（pbs配）孵育1次15min.

6、pbs清洗标本3次，各3min.

7、3%h2o2(pbs配）孵育15min.

8、pbs清洗标本3次，各3min.

9、5%bsa(,pbs配）封闭标本3min.

10、一抗（1%bsa配，1:100~1:200）4c过夜。阴性对照最好用一抗来源血清，否则用pbs液（湿盒）

11、pbs清洗标本3次，各3min.

12、二抗孵育（湿盒）1%bsa配，30min，避光；

13、pbs清洗标本3次，各3min，dapi染核5min，pbs清洗标本3次，各3min。 14、95%甘油封片防止荧光猝灭。

注意：冲洗时只需轻轻震荡培养皿(易脱片）

加一抗、二抗后冲洗时一、产品组成：

提取液a、提取液b、蛋白酶抑制剂混合物、磷酸酶抑制剂混合物。

注意：

1、蛋白酶抑制剂混合物避免反复冻融；

2、如果试剂盒不能短时间内用完，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。

3、蛋白提取液、磷酸酶抑制剂2~8c保存；

4、蛋白酶抑制剂-20c保存。

二、使用方法：

使用注意事项：

1、旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。

2、实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20c冰箱预冷。整个过程需保持样品处于低温。

3、蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。

4、可以根据自己试验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。

5、western试验内参可以选用lamina、laminb、tbp、histon h3.

细胞蛋白的提取：

1、提取液制备：每200ul冷的蛋白提取液a和b中分别加入2ul蛋白酶抑制剂

混合物和磷酸酶抑制剂，混匀后置冰上备用。2、取5~10x10*6个细胞，在4c，500xg条件下离心2~3分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞。

3、用冷pbs洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。

4、每20ul细胞压积中加入200ul冷的提取液a，高速涡旋震荡15秒或吹打混匀，置冰上15分钟，中间每隔5分钟涡旋震荡或吹打混匀。

5、再次高速涡旋震荡5秒，然后在4c，12000g条件下离心5分钟。

6、快速将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到胞浆蛋白，请置于冰上或-80冰箱保存备用。

7、沉淀用pbs洗涤一次，然后再4c，12000g条件下离心5分钟，弃上清。

8、在沉淀中加入200ul冷的提取液b，高速涡旋震荡15秒。

9、置冰上40分钟，每隔10分钟高速涡旋震荡15秒。

10、在4c，12000g条件下离心10分钟。

11、快速将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到核蛋白。

12、将上述蛋白提取物定量后分装于-80冰箱保存备用或直接用于下游试验。

注： a..细胞数量根据试验情况调整，每次的提取液用量并不是一定的，请根据实际情况调整。

b.建议用bca法进行蛋白定量。

c，蛋白样品-80存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被细菌污染。

组织蛋白的提取：1、提取液制备：每200ul冷的蛋白提取液a和b中分别加入2ul蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。

2、取适量组织样本剪碎，加冷pbs，用组织匀浆器匀浆至无明显肉眼可见固体（或用液氮研磨），冰上静置5分钟，小心将上清吸入另一预冷的干净离心管。

3、在4c，500g条件下离心2-3分钟，弃上清。

4、每20ul细胞压积中加入200ul冷的提取液a，高速涡旋震荡15秒或吹打混匀，置冰上15分钟，中间每隔5分钟涡旋震荡或吹打混匀。

5、再次高速涡旋震荡5秒钟，然后在4c，12000g条件下离心5分钟。

6、快速将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到胞浆蛋白，请置于冰上或-80冰箱保存备用。

7、沉淀用pbs洗涤一次，然后在4c，12000g条件下离心5分钟，弃上清。

8、在沉淀中加入200ul冷的提取液b，高速涡旋震荡15秒。

9、置冰上40分钟，每隔10分钟高速涡旋震荡15秒。

10、在4c，12000g条件下离心10分钟。

11、快速将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到核蛋白。

12、将上述蛋白提取物定量后分装于-80保存备用或直接用于下游实验。

注：a，用液氮研磨的方法更佳。

b，建议用bca方法进行蛋白定量。

c，蛋白样品-80存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被细菌污染。篇六：药理实验报告1

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中枢药物筛选与有效性研究设计性实验

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题目：作用于中枢神经系统兴奋药物ld50的测定。姓名：何嘉健

（班别，实验组别, 学号全号）药物制剂12（1）班实验2组 1203502116 【摘要】目的：作用于中枢神经系统药物通常可范围三类作用于中枢神经系统的药物主要影响递质和受体而发挥作用，而其药理效应主要表现是中枢神经系统的增强或抑制；通过观察动物的药物反应，可初步区分药物的特性。通过药物ed50或者ld50的测定，分析其有效性和安全性。中枢神经兴奋药是一类能选择性兴奋中枢神经药物，提高其功能活动的药物。按中枢兴奋药物的特点划分：1神经振奋药；2苏醒药；3改善脑代谢的药物。1中枢兴奋药物的作用部位可随剂量的增加而扩大，大剂量可引起中枢神经系统的广泛兴奋导致惊厥。我们采用平均分配法测量药物的ld0、ld100的大致区间，再在正式试验中测量小鼠的死亡率，从而得到药物具体的ld50。小鼠的注射方式都为腹腔注射。从结果我们可以判断出来，预实验中可判断ld0为20%稀释母液，ld100为60%稀释母液，该兴奋药的半数致死量为…

从而我们得出结论：该兴奋药的半数致死量为…。

【关键词】中枢神经兴奋药平均分配法腹腔注射半数致死量量效关系

前言

现今社会人们对健康的要求有了更高的要求，作为治疗、预防和诊断疾病的药物，人们对它的安全性的研究技术也不断发展。对制药行业来说，作用于中枢神经系统（cns）药物或许是最具挑战性，同时又是回报最丰厚的市场之一。快速增的cns药物市场中，仍有许多尚未得到满足的临床需求以及新的治疗方法，近年来，研究人员针对中枢神经系统疾病的特点开发了多种疗效高、使用方便的药物新制剂，对人类治疗中枢系统疾病有重要的作用。

作用于中枢神经系统的药物主要是影响递质和受体，中枢神经系统内不但神经递质种类较多，而且神经激素及神经调质等亦起重要作用。目前作用于中枢神经系统的药物种类很多，如抗焦虑药、抗抑郁药、催眠药、抗震颤麻痹药和抗精神失常药等。这类药物用药时间长，副作用出现频率高，有可能出现不可逆的后遗症；有的药物过量服用，还能引起致死性中毒。对此必须高度重视。

一. 实验目的

学习如何筛选有效的药物，通过设计性实验锻炼和提高科学研究的思维方式、

库宝善主编，神经精神药理学，北京大学医学出版社，2006,1

药理学实验设计原则和方案。最终达到提高学生发现问题、提出问题、分析问题和解决问题能力，提高学生的自学能力、实践能力和团队协作能力，培养学生的科学思维和创新能力。

二. 实验原理

作用于中枢神经系统的药物主要影响递质和受体而发挥作用，而其药理效应主要表现是中枢神经系统功能的增强或抑制，通过观察动物的药物反应，可初步区分药物的特性。通过药物ed50或ld50的测定，分析其有效性和安全性。药物给药药剂量与动物死亡率间呈正态分布。以对数剂量为横坐标、累加死亡率为纵坐标作图，即可得到一对称s型曲线，其两端较平坦，中间较陡，说明两端处剂量稍有变化时死亡率的改变不易表现出来，在50%死亡率处斜率最大，该处剂量稍有变化时，其死亡率的变动最明显，即最灵敏，在技术上也很容易准确测得，故常选用ld50值作为反映药物毒性的指标。若将死亡率换算成几率单位，则对数剂量与几率单位呈直线关系，用数学方法可拟合其回归方程式，可精确地计算ld50及引起人和死亡率的剂量及相关数据。

三. 实验步骤

1 预实验

（1）目的

【2】初步筛选出具有某种特定作用的药物。初步探索0％和100％动物有效的剂量范围，以便正式实验时确定各组剂量。（2）动物

小鼠21只，体重18～30g，雌雄各半，实验前禁食12小时。（3）器材和药品

器材：分析天平、注射器、针头、烧杯、鼠笼

药品：4-6号药品（中枢兴奋药、中枢抑制药、安慰剂）（4）实验步骤

将所有小鼠进行标号称重，分成6组，每组三只。

随机选出一组小鼠用于药品筛选，按0.2ml/10g对小鼠进行腹腔注射给药。观察记录小鼠反应现象。根据小鼠的反应现象，选取兴奋药作为本次实验药物。

测定ld0~ld100的剂量范围。

将剩余的5组小鼠按0.2ml/10g分别（1）腹腔注射100%的母液（2）腹腔注射80%的母液（3）腹腔注射60%的母液（4）腹腔注射40%的母液（5）腹腔注射20%的母液。观察3-5分钟，记录小鼠的反应现象。记录小鼠的死亡数。

通过实验现象观察，得出结果，找出我们组兴奋药能引起小鼠的0%和100％半数致死量及其所在的范围。